24孔板細(xì)胞培養(yǎng)小室有哪些常見問(wèn)題

　　24孔板Transwell實(shí)驗(yàn)的門道，但實(shí)際操作中總會(huì)遇到些小狀況。

　　一、細(xì)胞接種與生長(zhǎng)問(wèn)題

　　細(xì)胞生長(zhǎng)不均或局部死亡?

　　現(xiàn)象?：換液后部分孔細(xì)胞死亡，形成"半圓分界線"。

　　原因?：培養(yǎng)箱架子不水平導(dǎo)致液體分布不均;培養(yǎng)基溫度過(guò)低(如直接從4℃冰箱取出)造成冷休克。

　　解決?：確保培養(yǎng)箱水平;將培養(yǎng)基提前在37℃培養(yǎng)箱平衡15-30分鐘。

　　細(xì)胞分布不均

　　現(xiàn)象?：接種后細(xì)胞聚集在孔邊緣，細(xì)胞稀疏。

　　原因?：加液方式不當(dāng)導(dǎo)致液體表面張力效應(yīng); 培養(yǎng)基體積不足形成彎液面。

　　解決?：使用多道移液器均勻加液;確保每孔加液量充足(通常500-650μL)。

　　二、Transwell小室操作問(wèn)題

　　氣泡產(chǎn)生?

　　現(xiàn)象?：小室放入下室時(shí)產(chǎn)生氣泡，影響趨化梯度。

　　解決?：放置后若見氣泡，用鑷子輕提小室去除，再放回。

　　基質(zhì)膠鋪板問(wèn)題?

　　現(xiàn)象?：鋪膠后膠體不均勻或凝固不良。

　　解決?：Matrigel基質(zhì)膠用無(wú)血清培養(yǎng)基按1:8比例稀釋，取60μL均勻鋪于上室，37℃孵育1-4小時(shí)。

　　三、污染與蒸發(fā)問(wèn)題

　　現(xiàn)象?：培養(yǎng)物污染或液體蒸發(fā)。

　　原因?：培養(yǎng)板蓋子較松，利于氣體交換但增加污染和蒸發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。

　　解決?：保持培養(yǎng)箱內(nèi)清潔，放置無(wú)菌水槽維持濕度100%。

　　四、其他常見問(wèn)題

　　細(xì)胞狀態(tài)不佳?：接種前細(xì)胞應(yīng)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，活力良好。

　　培養(yǎng)時(shí)間不當(dāng)?：根據(jù)細(xì)胞類型優(yōu)化時(shí)間。

　　換液操作不當(dāng)?：在通風(fēng)櫥內(nèi)換液時(shí)，關(guān)閉風(fēng)機(jī)或逐孔操作，避免氣流導(dǎo)致培養(yǎng)基快速蒸發(fā)。

　　注：供科研使用，以上資料供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師是或品牌商。

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